Cy7是一种近红外花青素荧光染料。由于它的荧光波长(Em:770nm)恰好处于肌体组织近红外窗口I的区域(肌体的血液,体液和组织此区域背景荧光弱,而长波长穿透性强),所以Cy7常常应用于小动物活体体内成像中。Cy7荧光肉眼不可见,并且显微镜观察时需要近红外滤片,很多荧光显微镜(包括共聚焦显微镜)并不配备,但是流式细胞仪(flow cytometry)常常配备Cy7滤片组。Cy7是常用荧光染料,Cy7可以用来标记核酸,蛋白,抗体,多肽等,它是最常见的小动物显影剂之一。
NHS活化酯(N-羟基琥珀酰亚胺酯,N-hydroxysuccinimide ester,succinimidyl ester)是生物标记反应中最常用的活化基团。它活化Cy7分子中的羧基,让它可以和目标生物分子上的胺基(伯胺或者仲胺)反应生成稳定的酰胺键,从而把Cy7分子标记到生物大分子上。由于游离胺基是蛋白,抗体,多肽表面的常见官能团(来自于赖胺酸侧链),Cy7-NHS可以和它们直接反应。核酸分子中天然不带游离胺基,只有胺基修饰过的RNA或者DNA才可以和Cy7-NHS反应。另外,Cy7-NHS也可以标记聚合物胺基,纳米粒表面胺基等。
Cy7-NHS活化酯的水溶性较低,所以在水相的标记反应体系内需要使用有机共溶剂,常用有机溶剂包括DMF,DMSO和乙腈等。如需标记的分子对有机溶剂敏感,可选择磺化花青素(sulfonated cyanine),即sulfo-Cy7-NHS活化酯。两者的光谱性质几乎一致,因此大部分应用可相互替换。两者的主要区别在于:磺化染料是水溶性的,在水相的标记反应体系内不需要使用有机共溶剂,并且降低染料在水中聚集的可能性,增强标记效率。
Cy7-NHS标记后的产物Ex/Em是740/770nm。和它具有相似荧光特性的染料包括Alexa Fluor 750,DyLight 755等。
CAS号 | 1432466-81-3(类似) |
分子式 | C38H44ClN3O4 |
分子量 | 642.23 |
结构式 | |
光谱特性 | Ex/Em=740/770nm(MeOH/PBS) |
消光系数 | 199000L·mol-1·cm-1 |
量子产率 | 0.3 |
外观 | 绿色固体 |
溶解性 | 易溶于DMF等有机溶剂 |
保存条件 | 避光,干燥,-20℃保存 |
- NHS ester基团对湿度比较敏感,务必干燥保存产品。使用前产品需放到室温回温至少20分钟。
- 使用不含氨基的缓冲体系。比如磷酸钠缓冲液(PBS),Hepes缓冲液,碳酸氢钠缓冲液,或硼酸缓冲液等。不要使用任何含伯胺或仲胺的缓冲液,比如Tris,甘氨酸等。高浓度咪唑(imidazole)也会影响反应。
- 标记反应不要放在强光下,因为大部分荧光化合物在强光下长时间照射会缓慢光漂泊。
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